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【代怀哪里便宜】血浆凝固酶试验原理

病原性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，附于细菌表面，生成凝块，因而具有抗吞噬的作用。凝固酶试验对于判定该菌株是否具有致病力，很有帮助。葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。

葡萄球菌所产生的凝固酶有以下两种：

结合凝固酶（即凝聚因子）：是一种结合于菌体细胞壁的酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使之变成纤维蛋白，而使葡萄球菌凝集成块，玻片法阳性结果是由此酶（凝聚因子）所致。

游离凝固酶：是凝血酶原样物质，不直接作用于血浆纤维蛋白原上，而被血浆中的致活剂（即凝固酶致活因子）激活后，变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使血浆中的液态纤维蛋白原变为固态纤维蛋白，从而使血浆凝固。试管法的阳性结果为此酶所致。

玻片法：

在1张洁净玻片中央加1滴9g／L氯化钠(生理盐水)溶液，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照） 制成菌悬液，若经10～20s 内无自凝现象发生，则加入兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。5～10s内出现凝集者为阳性。

试管法：

用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释，取0．5 ml于试管再加0.5ml待测菌浓菌悬液（需做阳性对照及阴性对照。），混匀后置37℃水浴中，每30min观察1次结果。若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管（即浓菌液管）不凝固，为阳性；若阴性，继续观察到24小时，不凝固者为阴性。如有凝块或整管凝集出现为阳性。4h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。

（商品化）冻干血浆法：

每支西林瓶加入0.5mL灭菌生理盐水至完全溶解，然后加入葡萄球菌24h肉汤培养物0.3mL，充分混匀， 盖好西林瓶胶塞，置于36±1℃培养，在6h内定时观察结果。结果观察(如下图所示)：倾斜或倒置试管时，呈现凝固块，或凝固块体积大于原体积的一半时，为血浆凝固酶阳性。观察结果时应避免用力振动西林瓶，以免凝块振碎。

血凝固酶实验

血浆凝固酶试验应用：

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本试验仅用于致病性葡萄球菌的鉴定。

玻片法：

10 秒内观察结果，如超过10 秒可出现假阳性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。 可选择的玻片凝集试验法还包括检测凝集因子和蛋白A的胶乳凝集试验。但胶乳凝集试验和玻片凝固酶试验的结果并不完全一致。

尽管胶乳凝集试验鉴定路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis）的可靠性较差，但鉴定金黄色葡萄球菌的特异性和灵敏性均高于传统的玻片凝固酶试验。有些腐生葡萄球菌和松鼠葡萄球菌及某些微球菌属的菌种可能胶乳凝集试验阳性，但玻片凝固酶试验通常阴性。

a. 试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间（4H以上）孵育，才可出现阳性。

b. 如果培养时间超过4H，应考虑以下几点：

Ⅰ.延长培养时间后，有些菌株产生的葡萄球菌激酶（溶纤维蛋白酶），可以裂解凝块，产生假阴性结果；

Ⅱ.如果使用的血浆不是无菌的（或部分不是无菌的），假阳性和假阴性结果均有可能发生；

Ⅲ.所用待测菌不纯，延长培养时间后，污染菌可能导致假阳性结果。在这点上，含EDTA的血浆优于柠檬酸盐血浆，因为利用柠檬酸盐的细菌（如一些链球菌）可能通过消耗柠檬酸盐促进凝集发生。

Ⅳ.所用血浆缺乏纤维蛋白原（脱纤维血浆）。

试管法：

须制备浓厚的均匀菌悬液，以便观察结果。

最好用EDTA 抗凝的兔血浆，不主张用人的抗凝血，除非经过试验证实其中不含感染因子、没有凝血能力和没有抑制因子。不同种动物血浆因子不同，凝固状态也不同，兔血浆凝块结实，凝固速度快，优于人血浆。

试验不可在高盐培养基上的取菌落，因为可能出现自凝或假阳性。

若被检菌为陈旧的肉汤培养物（超过18～24H），或生长不良，凝固酶活性低的菌株可能检测不出来。

为防止玻片法检测的假阳性反应，必须严格按《全国临床检验操作规程》进行操作。当怀疑待测菌是金黄色葡萄球菌时，对玻片凝固酶阴性的结果应做试管法凝固酶试验确证。玻片法和试管法凝固酶试验的血浆标准是:必须含有足够浓度的凝固酶反应因子和纤维蛋白原，必须无溶纤维蛋白活性和无抑制剂。

本试验应同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性的葡萄球菌的肉汤培养物作为对照。

商品化冻干血浆试剂需按照厂家提供的产品说明书使用及结果判读。

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克隆之风愈刮愈烈，除了这三个人之外，相信仍有不少科学家在暗中从事这方面的研究。那么，克隆人的出现看来是不可避免的了。但关于克隆伦理的争议，使得大多数人并不看好克隆人 的降生。 2002年12月28日，就在布瓦瑟列耶的克隆援助公司宣告“夏娃”降生后不久，梵蒂冈发表声明指出，克隆人的事情“本身是一种残忍的表现，全不顾及任何伦理道德和人性”，“已经引起了国际科学界的怀疑和道德谴责”。

大部分西方人的思想被类似的观念主宰着。2001年，CNN和《时代》周刊做了一项联合调查，调查结果表明近9成的美国民众不赞成克隆人。反对的原因中，有3成的人是从宗教信仰角度看待这个问题的。超过9成的人承认，如果克隆技术真成功了，他们也绝不会克隆自己。

试管婴儿技术的学名为“体外受精胚胎移植”，英文缩写为IVF。爱德华和斯特普托从1966年就开始进行IVF技术的研究。不过，经IVF受孕的约80例患者几乎无一例外地流产了。1977年，他们遇到了9年未育的约翰和莱斯利·布朗夫妇。在进行试验前，爱德华教授依然对他们表明，手术可能会存在许多问题，比如流产、胎儿不健康等。布朗夫妇没有怨言地接受了，并愿意承担可能发生的一切后果。就这样，路易斯·布朗幸运地降生了。

阿瑟·卡普兰是宾夕法尼亚大学的教授，他就强烈反对克隆人。他说：“克隆并不能成就永生。那个克隆出来的是另一个人而不是自己。如果我用枪打死了双胞胎中的一个，另一个肯定还会活蹦乱跳的，虽然他们是同一个细胞分裂出来的。所以，人们追求永生的途径不可能通过克隆来完成。” 克隆羊“多莉”的制造者伊恩·维尔穆特不止一次说过，克隆人是“不负责任地犯罪”，科学家应极力抵制这种事情的发生。维尔穆特在克隆研究领域有着丰富的经验，他清楚克隆的动物胚胎的死亡率高达98%，很多胚胎出生不久便死掉了。即使侥幸存活下来，死亡率仍然居高不下。

原因很复杂，有的是因为某个器官过于庞大，有的是因为心脏及免疫系统的疾病。 维尔穆特告诫那些想克隆人的科学家：“如果一个克隆儿生下来就被诊断为不能够存活，我们可不可以像对待一只羊一样对他实行安乐死呢？而即使我们不这么做，他肯定也会不久就死去。 而且，很显然的一个事实是，如果我们用一个因某种疾病死的孩子的细胞做克隆，那个新生的婴儿也许注定要死亡。”

另一位科学巨匠——“试管婴儿之父”爱德华教授的观点跟维尔穆特一样，也反对在现行条件下进行人类克隆。不过，他的理由不是基于伦理，而是成功率。 爱德华认为现在做克隆人的尝试不明智。他以克隆羊“多莉”为例，制造“多莉”一共使用了277个卵细胞，最终发育成胚胎的只有29个，刚过一成。而这29个胚胎，最后只有“多莉”正常出生了，其他胚胎不是胎死腹中，就是发育得不正常，成为畸形。科学家做过的其他克隆实验也都是这个命运，无论是牛、猫，还是兔子等。爱德华说现在进行克隆人实验，安全性肯定是无法保证的。